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让两束波长不同的单色光交替通过同一个吸收池，从而测得在两个波长处的吸光度之差的分光光度计。由于测量时用了两个波长的光通过同一吸收池，消除了制备参比溶液及选用吸收池不匹配而引起的误差，还可绘制导数光谱，提高了测量的选择性和灵敏度，扩大了分光光度计的应用范围。
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