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使两束波长不同的单色光交替通过同一吸收池，从而测得在两个波长处的吸光度之差的方法。其最大优点在于能直接分析混合组分而不必经过化学分离或用麻烦的解联立方程式的方法。而且可分析浑浊样品。参见“双波长分光光度计”。
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