液氮保藏liquid nitrogen cryopreservation

利用液态氮的超低温(-190～-150℃)保存菌种的方法。在此低温条件下，微生物细胞处于深度休眠状态，菌种变异很小，是一种长期保藏菌种的优良方法。一般操作程序是：选择能抗低温、抗温度骤变的硅硼玻璃制安瓿瓶，容积约1.2 ml，其中加入保护剂，10%甘油或二甲亚砜等，加棉塞灭菌。将待保藏菌种的悬液或琼脂培养块加入其中，火焰熔封。在自控降温仪中以每分钟1℃的缓慢速度冷却至—35℃～—25℃，然后转入液氮罐保藏。复原时，取出安瓿瓶即放入35～40℃的水浴中急速解冻，至全部融化为止。无菌操作开启安瓿瓶，即可使用。液氮保藏法对所有微生物种类都适用，但投资较大。